הפרדת חומרים בתמיסה באמצעות מצע מוצק כלשהו נקראת כרומטוגרפיה. ניתן להפריד בין חלבונים בזכות היכולת לפתח נוגדנים ספציפיים הנקשרים לחלבון יחיד. כאשר מצמידים את הנוגדנים לשביבים זעירים ניתן לקשור אליהם את החלבון הרצוי. אם נדע להפריד את השביבים משאר התמיסה נוכל לקבל את החלבון הרצוי ללא חלבונים אחרים. הסרטון שלפנינו מציג דרך אחת (מני רבות) לעשות זאת.
הסרטון הופק בידי Fisher scientific
שיטת הפרדת חלבונים בעזרת נוגדנים הקשורים לשביבים זעירים עובדת על עיקרון של קשירת החלבון הרצוי לשביב גדול שאותו ניתן להפריד מהתמיסה ולאחר מכן להפריד בין החלבון לשביב. במקרה זה מדובר בשביב מתכת, אשר ניתן להפרידו באמצעות מגנט. פרוטוקול העבודה הוא: הוספת שביבי מתכת המצופים בנוגדנים המתאימים רק לחלבון הרצוי (מסומנים כ C בסרטון), החלבון הרצוי (מסומן כ B בסרטון) נקשר לנוגדנים על גבי השביבים, ולאחר מכן נחשפת המבחנה לכח מגנטי המושך את השביבים אל דופן המבחנה. השלב הבא הוא הרחפה של המשקע בתמיסה נקייה והפרדת החלבון מהנוגדן באמצעת תמיסה בסיסית או חומצית, אשר מחלישות את הקשר בין החלבון לנוגדן. לבסוף שוב מפעילים כח מגנטי ושואבים את התמיסה המכילה את החלבון בלבד.
המחמירים נוהגים להרחיף את השביבים עם החלבון הקשור בתמיסה נקייה אשר איננה משחררת את החלבון ולחזור על הכח המגנטי ושפיית הנוזל, על מנת לנקות את השבבים מעודפי חלבונים אשר אינם שייכים ונשארו בתמיסה. ישנן ערכות כאלו כם להפרד תאים שלמים על בסיס חלבון ממברנלי אשר ייחודי לאותה קבוצת תאים.
קימות שיטות נוספות העובדות על אותו העקרון רק שבמקום למגנט את השביבים משקיעים אותם בעזרת צנטריפוגה (סיבוב במהירות גבוהה). בשיטה זו השביבים במקום להדבק לדופן המבחנה, שוקעים בקרקעיתה, ויותר נוזלים מצטברים ביחד איתה, על צריך לשטוף אותה שוב.
מאת: ארז גרטי
המחלקה לכימיה ביולוגית
מכון ויצמן למדע
הערה לגולשים
אם אתם חושבים שההסברים אינם ברורים מספיק או אם יש לכם שאלות הקשורות לנושא, אתם מוזמנים לכתוב על כך בפורום. אנו נתייחס להערותיכם. הצעות לשיפור וביקורת בונה תמיד מתקבלות בברכה.
