PCR (ראשי תיבות של polymerase chain reaction) היא שיטה שבאמצעותה מגבירים מקטעי DNA על ידי רצף של מחזורי חימום, המדמים את תהליך שכפול ה-DNA. אחת מהשיטות הנגזרות שלו, ה-Realtime PCR מאפשרת לקבל תוצאות כמותיות יותר המעידות על קצב הגברת ה-DNA בעזרת חומרים פלורסנטיים. לשתי השיטות מאפיינים דומים, אך שימושים שונים. הסרטון שלפנינו מראה את השלבים השונים של שתי השיטות ועומד על היתרונות הבולטים של ה-Real-time PCR .
סרטון זה תורגם בידי צוות דוידסון אונליין
הסרטון הופק בידי חברת scanelis
ה-PCR ראשי תיבות של polymerase chain reaction (תגובת שרשרת של DNA פולימראז), הינה שיטה בביולוגיה מולקולרית, שנועדה להגביר מקטעי DNA. עקרון השיטה, שזיכתה את ממציאה בפרס נובל, הוא מאוד פשוט. חימום של DNA דו גדיל לחום גבוה (95 מעלות) הגורם להפרדות הגדילים (שלב הדנטורציה או פרימה), קירור לטמפרטורה של 45-70 מעלות גורם להצמדות קטעי DNA קצרים (פריימרים או תחלים) אל אתרי ההתאמה שלהם (אנילינג או איחוי), וחימום ל-72 מעלות המאפשר סינתיזה של גדיל DNA משלים החל מהפריימר ואילך (אלונגציה או התארכות). חזרה על מחזור כזה מספר רב של פעמים (עשרות) גורם להגברה לוגריטמית של כמות קטעי ה-DNA. הקטע המוגבר הינו הקטע התחום בשני הפריימרים שהוספו.
ל-PCR נגזרות רבות. אחת מהן היא שיטת ה- Real-time PCR (תגובת שרשרת של DNA פולימראז בזמן אמת). בשיטה זו קיימים אותם שלושת השלבים של ה-PCR הרגיל, בתוספת חומר המשחרר אות פולרסנטי עם היווצרות מולקולות DNA דו-גדיליות חדשות. כך ניתן לדעת כמה עותקי DNA קיימים בכל מחזור חימום, ולהשליך משם על פעילות הגן המקודד על ידי אותו מקטע DNA. יתרון נוסף לשיטה זו הוא רגישותה. תוצרי PCR רגיל נצבעים בצבע מיוחד (ומסרטן) שנקרא אתידיום ברומיד, ומופרדים על ג'ל אגארוז על ידי אלקטרופורזה (ראו ערך) דבר המאפשר הערכה איכותית (לא כמותית) של כמות ה-DNA. במקרה של Real-time PCR , המכשיר מכיל גלאי פלורסנציה מאוד רגיש המסוגל לתת מידע כמותי על כמות ה-DNA. החסרון היחיד של Realtime PCR הוא מחירו היקר (גם החומרים וגם המכשיר).
מאת: ארז גרטי
המחלקה לכימיה ביולוגית
מכון ויצמן למדע
הערה לגולשים
אם אתם חושבים שההסברים אינם ברורים מספיק או אם יש לכם שאלות הקשורות לנושא, אתם מוזמנים לכתוב על כך בפורום. אנו נתייחס להערותיכם. הצעות לשיפור וביקורת בונה תמיד מתקבלות בברכה.